martes, 24 de abril de 2012

2.3.2  Selección de plantas madres
Elegir las mejores plantas, las mas grandes, libres de patógenos, que estén vigorosas, la rapidez en el crecimiento, la producción de callos, la resistencia a enfermedades, etc.

              2.3.3     explante
Tejido removido de un organismo y transferido apara su crecimiento a un medio artificial de nutrientes.
Para el medio de cultivo se debe elegir el explante o la parte de la planta que se va ha sembrar: semilla, raíz, hoja, yemas, tallos, óvulos y anteras, segmentos nodales.

              2.3.4   siembra del explante
Una vez que se tienen los explantes estos deben de ser desinfestado correctamente para evitar la proliferación de contaminantes biológicos (hongos, bacterias, y levaduras principalmente) los cuales afectan el crecimiento y desarrollo del explante.

               2.3.5    condiciones de incubación
·         luz: 500 lux.
·         temperatura: 18 – 25 ºC.
·         polaridad: debe de conservar la polaridad de la planta madre.
·         fase gaseosa: es el espacio de aire que se encuentra en el frasco, en este caso en el medio de cultivo el intercambio de aire con el interior debe de ser muy nulo.
·         Humedad: debe de ser 100 % dentro del frasco.
·         Sub cultivo: con el paso del tiempo los explantes pierden el poder vegetativo (multiplicación) y aumentan las mutaciones.

           2.3.6  Cambios fisiológicos del explante
En el explante como se encuentra encerrado en el frasco y no esta acostumbrado a los cambios del ambiente, cuando es sembrado en el medio ambiente no estará acostumbrado a los parámetros del medio debido a que dentro del frasco no corre aire.
·         El explante tendrá la cutícula más delgada y la epidermis estará desorganizada.
·         El parénquima será ineficiente para la fotosíntesis.
·         Los estomas no funcionaran al 100 %.
·         La planta sufrirá vitrificación y estas no serán muy viables.
·         Las raíces estarán más delgadas.
·         El color de la planta será mas claro.
·         La planta estará más inchada.

           2.3.7     trasplante al sustrato
Si se planta el explante en el campo o vivero la planta muere en 7 minutos.
Para que la planta sobreviva se debe primeramente aclimatar para que se endurezca durante 4 a 8 semanas siguiendo estos pasos.
1.    se controla la luz desde 20% hasta el 100% durante un tiempo, empezando desde el 20% hasta llegar 100% para que se acostumbre.
2.    En las primeras dos semanas el explante se riega con m.s. 25% diluido en el agua de riego.
3.    La humedad relativa se mantiene en 100 con nebulizadores esto se hace regando con partículas mas pequeñas de agua (roció de agua).
4.    Las raíces del explante se deben de cortar para que crezcan nuevamente agregándole enrraizador.



2.3     Establecimiento C.T.V.

El explante a sembrar en el medio de cultivo es el segmento nodal. Este debe llevar parte del tallo, de peciolo, yema axilar, etc.

Los principales factores que afectan el C.T.V.
·         Asepsia: limpieza del medio, material, equipo y explante.
·         Genotipo: características propias del explante.
·         Efecto de posición y competencia.
·         El explante: tamaño, fuente, edad fisiológica.
·         Medio de cultivo.
·         Luz.
·         Temperatura.
·         Polaridad.
·         Fase gaseosa.
·         Humedad.
·         Sub cultivo.
·         Estación.

2.3.1    Etapas del C.T.V.

·   ETAPA 0; Establecimiento de plantas donadoras: esta etapa consiste en plantar un vegetal y tenerlo en asepsia en un lugar (vivero) protegida contra insectos para que no se contamine y tomar el explante de ahí.

·   ETAPA 1; Instalación aséptica (in vitro): instalación aséptica del explante al medio de cultivo.

·    ETAPA 2; multiplicación: cuando la planta crece en el medio de cultivo y esta se puede propagar nuevamente.

·     ETAPA 3; Enraizamiento: la planta se deja enraizar aplicando auxinas.

·      ETAPA 4; Adaptación a campo: cuando ya esta enraizada se planta en un vivero (maceta) y a las 2 o 6 semanas se planta en el campo.


2.2 Esterilización

Son una serie de métodos físicos-químicos que sirven para eliminar los microorganismos y las esporas de la superficie de instrumentos y medios de cultivo.

Desinfección: cuando a un objeto se le remueve la suciedad o microorganismos, los objetos son solo material inerte “bisturí”.

Desinfestación: es cuando remueven superficialmente los microorganismos con métodos suaves pero solamente a vegetales y se puede utilizar: HgCl2, NaClo, alcohol.

           2.2.1     Tipos de esterilización

Físicos:

·         Fuego directo: mechero
·         Agua hirviendo
·         Bacto-incinerador
·         Luz u.v.
·         Muflas (estufas)
·         Filtración: compuestos termoviles
·         Calor húmedo (autoclave) (olla de presión)

Químicos:

·         Oxido de etileno
·         Hipoclorito de sodio
·         Hipoclorito de calcio
·         Ozono
·         HgCl2
·         Peróxido de hidrogeno
·         Nitrato de plata
·         Yodex
·         Aldehído
·         Fenol
·         Alcohol etanol
   


             2.2.1     Factores que intervienen en el proceso de esterilizacion

       Factores que intervienen en el calor húmedo:
·         Temperatura: 121°c
·         Tiempo: 20´2
·         Presión: 15 psi (1.2kg/cm2)